ELISA試劑盒約40分鐘顯色達，隨即逐漸減弱，至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。

　　ELISA試劑盒實驗中顯色是ELISA試劑盒中的zui后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，ELISA試劑盒加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯se情況適當縮短或，及時判斷。

　　ELISA試劑盒的實驗操作程序簡述：

　　1.準備試劑，樣品和標準品；

　　2.加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘；

　　3.洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘；

　　4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應10分鐘；

　　5.加入終止液；

　　6.15分鐘之內度OD值；

　　7.計算。